Classificação dos Leucócitos

MALDI-TOF: nova tecnologia no laboratório de microbiologia clínica

Estive nesta semana no Fórum Permanente de Patologia Clínica, promovido pela Faculdade de Ciências Médicas da Unicamp. O fórum tratou das novas tecnologias empregadas no laboratório clínico, e uma delas foi o Maldi-Tof.

O MALDI-TOF é uma tecnologia recente empregada nos setores de Microbiologia, cujo nome significa Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight. Trata-se de um método de identificação bastante rápido e preciso em relação a outros métodos de automação tradicionais que se tem no mercado.

Muitas das técnicas convencionais se baseiam na identificação dos microrganismos através de provas bioquímicas, analisando o seu fenótipo. O resultado destes métodos se dá entre 12 e 24 horas, o que atrasa a liberação do laudo e terapia antimicrobiana dos pacientes.

O MALDI-TOF é uma técnica de espectrofotometria de massa nova, que detecta moléculas de massa maior, como as proteínas. O teste então baseia-se na detecção de um grande espectro de proteínas, podendo então discriminar melhor as espécies. A espectrofotometria de massa é largamente utilizada em outras áreas, como a toxicologia, mas até então não era uma realidade na rotina dos laboratórios de microbiologia. “A evolução ocorreu quando a matriz utilizada para ionizar as proteínas foi mudada para que pudesse ionizar as proteínas ribossomais – estas bem mais conservadas do que as proteínas de superfície – o que levou à identificação de espécies e até subespécies de muitos microrganismos”.  

Koichi Tanaka (Shimadzu Corporation - Kyoto/Japão) ganhou o Prêmio Nobel 2002 em Química por desenvolver o método de ionização/dessorção para análises de espectrometria de massa em macromoléculas biológicas. O princípio tornou-se fundamental nos métodos padrões (MALDI, SELDI e DIOS) para análise estrutural de peptídeos, proteínas e carboidratos que torna possível a determinação rápida do conteúdo da proteína da célula intacta e do tecido vivo.

No teste, é necessário escolher a colônia a ser analisada, e posteriormente a amostra é dissolvida e colocada em uma placa contendo uma matriz polimérica. A placa é então irradiada com um laser de nitrogênio que vaporiza a amostra ionizando as moléculas que serão aspiradas e elevadas a um detector. Dependendo da molécula, o tempo de chegada será diferente (time of flight). Os dados obtidos através de gráficos que representam estas leituras serão comparados a uma base algorítmica de um site que contém um grande número de espécies de relevância clínica – incluindo microrganismos aeróbios, anaeróbios, microbactérias, leveduras e fungos filamentosos.

Preparação da amostra até a apresentação do gráfico. 

Maldi-Tof: como ocorre a espectrofotometria no aparelho. 

O procedimento é muito rápido, e diferente dos métodos convencionais, os resultados são dados em minutos, o que agiliza a liberação do laudo. Embora um dos pontos negativos seja o fato de o MALDI-TOF não obter parâmetros para antibiograma e este deva ser feito manualmente ou por outro método automatizado, o novo método de espectrofotometria dá indicações e diretrizes ao microbiologista referentes a resistências intrínsecas da bactéria.

Este vídeo é super bacana, e mostra o que o MALDI-TOF melhora ao ser implantado no laboratório. 

Fontes:
Richet Laboratório. 
Faculdade de Ciência e Tecnologia - Universidade Nova de Lisboa.
Schimatzu.
Biomériux. 

Biomédicos em Ação - IESA/Santo Ângelo-RS

Foto enviada por Etiene Lottermann

Estes são os formandos do curso de Biomedicina do Instituto Cenecista de Ensino Superior de Santo Ângelo- IESA (Santo Ângelo-RS). Da esquerda p/ direita em pé: Tatiane, Thaís, Anelise, Daiana, Etiene, Emanuela e Tatiele. Da esquerda p/ direita sentados: Alan, Elvis e Ricardo.

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Legionella pneumophila - Uni-BH

Os estudantes de Biomedicina estão se mostrando cada vez mais criativos, tanto no que se refere à ciência ou às artes! O Pedro Paiva enviou para nós o trabalho da sua equipe, do curso de Biomedicina – 5º período - do centro Universitário de Belo Horizonte/Uni-BH - Minas Gerais. O vídeo sobre a Legionella pneumophila ficou muito bom! Parabéns aos envolvidos!

Bem-vindo!

Olá Pessoal! Meu nome é Élio Carvalho, sou Biomédico formado na 1º turma do Estado do Piauí, com muito orgulho. Sou Perfusionista pela Sociedade Brasileira de Circulação Extracorpórea e Microbiologista pela UNICAMP. Atualmente faço Mestrado em Pediatria pela FCM-UNICAMP e sou Membro da Diretoria da SBCEC. Com muita satisfação venho informar a todos nossos amigos do Blog Biomedicina em ação que terei a honra de conversar com vocês através de uma coluna mensal que intitulamos “A Biomedicina como ela é” em homenagem ao grande escritor Nelson Rodrigues. Nordestino, assim como eu, Nelson ficou mais conhecido ao tratar de todos os assuntos, inclusive criticando a sociedade e instituições de forma objetiva.  A intenção da coluna é fornecer visão crítica aos acontecimentos recentes da Biomedicina, fomentando a discussão da classe, assim como sua cinética, levando a tão desejada mobilização profissional. Também teremos momentos de informação como novidades no diagnóstico, na pesquisa, na biomedicina como um todo; dúvidas comuns dos recém formados, discussões sobre novas áreas. O diálogo está aberto e convido a todos para a roda. Porque a biomedicina não para, porque a Biomedicina está em ação.

Agrega valor - UC

Só uma coisa: ÓTIMO!!!

Pirosequenciamento - Biologia Molecular

Estive em um evento na Faculdade de Ciências Médicas da Unicamp, promovido pela QIAGEN, uma empresa multinacional voltada à produção de equipamentos e kits para ensaios na Biologia Molecular. Um dos assuntos foi o pirosequenciamento, uma nova técnica que vem chamando a atenção.

O pirosequenciamento é uma nova técnica da Biologia Molecular, na qual a síntese de DNA ocorre através de um complexo de reações que inclui enzimas (ATP sulfurilase e luciferase) e substratos (adenosina 5’ fosfossulfato e luciferina). O grupo pirofosfato, liberado durante a adição de um nucleotídeo, resulta na produção de luz detectável. Portanto, quando um novo nucleotídeo é incorporado em uma cadeia crescente de DNA através da DNA polimerase, pirofosfato é gerado de maneira estequiométrica, resultando na produção de ATP. O ATP produzido leva à conversão enzimática da luciferase com emissão de fótons. À medida que os componentes da reação diminuem, um novo ciclo de reagentes é introduzido e então a incorporação de nucleotídeos específicos é avaliada de maneira sequencial.

A técnica baseia-se no sequenciamento e na síntese de DNA, fornecendo dados em minutos, assim como o mesmo conceito da reação de PCR Real Time, que é a obtenção de resultados rápidos. Os passos do pirossequenciamento seguem abaixo:

Passo 1:

Fazer a extração do DNA a ser sequenciado e amplificado.

Passo 2:

Um primer de sequenciamento é hibridizado para a amplificação de PCR de uma cadeia simples, sendo que o produto desta reação servirá como molde, e incubação com as enzimas DNA polimerase, ATP sulfurilase, luciferase, apirase, e também os seus substratos adenosina 5’ fosfossulfato (APS) e luciferina.

Passo 3:

O primeiro desoxirribonucleotídeo trifosfato (dNTP) é adicionado à reação. A DNA polimerase catalisa a incorporação do dNTP na fita de DNA, se este for complementar à fita molde. Cada evento de incorporação é acompanhado pela liberação de pirofosfato (PPi) numa quantidade equivalente à quantidade de nucleotídeo incorporado.

Passo 4:

ATP sulfurylase converte PPi para ATP na presença de adenosina 5’ fosfossulfato (APS). Esse ATP dirige a conversão mediada pela luciferase, de luciferina para oxiluciferina, que gera luz visível em quantidades proporcionais à quantidade de ATP. A luz produzida é detectada por um chip e vista como um pico na saída de dados de um software. Cada pico (sinal de luz) é proporcional ao número de nucleotídeos incorporados.

Passo 5:

A apirase, uma enzima de degradação de nucleotídeos, continuamente degrada nucleotídeos não incorporados e ATP. Quando a degradação está completa, mais nucleotídeos são adicionados.

Passo 6:

A adição de dNTP é realizada sequencialmente. Deve-se notar que o trifosfato de desoxiadenosina alfa-tio (dATP) é utilizado como um substituto para o natural desoxiadenosina trifosfato (dATP), uma vez que é utilizada eficientemente pela DNA polimerase, mas não é reconhecido pela luciferase. Enquanto o processo continua, a cadeia complementar de DNA é construída e a sequência nucleotídica é determinada a partir dos picos de sinal do rastreio.

Algumas aplicações

·      Estudo de deleções.

·      Quantificação de frequência de mutações.

·      Metilação – sequenciamento das ilhas CpG encontradas em regiões promotoras.

O vídeo abaixo explica como ocorre a síntese a liberação de luz para a formação dos picos em tempo real.

Fontes:

Texto modificado: Ministério da Ciência e Tecnologia.

Texto traduzido: Catálogo do PyroMark Q24 da QIAGEN.

Vídeo: youtube. 

Minicursos de Verão

De 25 de novembro a 05 de dezembro acontecerão na UNIP Campinas/Swift, os Minicursos de Verão, desta vez aberto a todos os alunos do curso de Biomedicina da Universidade.

As inscrições deverão ser realizadas pelo site. Os cursos oferecidos serão na área de Hematologia, Citopatologia Ginecológica, Análises Veterinárias e Coproparasitologia.

ATENÇÃO: as vagas para o Minicurso de Técnicas Básicas em Hematologia já se esgotaram. Garanta a sua vaga nos outros minicursos.

INSCRIÇÕES: http://biomedicinaunip.wix.com/minicursos

Realização: Alunos do 4º ano de Biomedicina, Coordenação e Supervisão de Estágio. 

Apoio: UNIP, Biomedicina em Ação, Birds Boomerangs, Locadora Campineira. 

Pedido de desculpas

Venho deixar aqui o meu pedido de desculpas pela falta de atualizações no blog. São muito os projetos que se acumularam, e infelizmente não consegui cumprir (mais uma vez) a minha função aqui, devido à grande rapidez e importância dos outros.

Mas estamos de volta à medida do possível!

Agradeço a compreensão de todos. 

Microbiologia e Imunologia na UFRJ

A Semana de Microbiologia e Imunologia acontecerá de 7 a 11 de outubro, com as inscrições que vão até o dia 13 de setembro. Trata-se de um evento idealizado e realizado por alunos do Curso de Bacharelado em Ciências Biológicas: Microbiologia e Imunologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Surgiu com o objetivo de integrar os estudantes de graduação das áreas biomédicas de todo o país, e de divulgar o Curso de Bacharelado em Ciências Biológicas: Microbiologia e Imunologia, proporcionando aos seus participantes um intercâmbio cultural e, principalmente, científico, assim como o contato com pesquisadores de diversas instituições do país.

Concomitante à XIX Semana de Microbiologia e Imunologia, será comemorado o Centenário do Professor Paulo de Góes, idealizador e fundador do Instituto de Microbiologia, cujo nome foi adicionado ao nome da instituição como uma homenagem a todo o seu trabalho e empenho dentro da Microbiologia.

Para mais informações, acesse: http://semanamicroeimuno.com.br/#

Facebook: https://www.facebook.com/semanademicrobiologiaeimunologia

O texto acima foi adaptado para esta publicação. Trata-se do texto indicado no site do evento.